PENGARUH LAMA WAKTU INFEKSI TERHADAP FREKUENSI TRANSFORMASI GEN AtRKD4 PADA TANAMAN KACA PIRING (Gardenia jasminoides J. Ellis) OLEH Agrobacterium tumefaciens EHA105

Christin, Sylvana (2020) PENGARUH LAMA WAKTU INFEKSI TERHADAP FREKUENSI TRANSFORMASI GEN AtRKD4 PADA TANAMAN KACA PIRING (Gardenia jasminoides J. Ellis) OLEH Agrobacterium tumefaciens EHA105. S1 thesis, Universitas Atma Jaya Yogyakarta.

Preview	Text (Sylvana Christin) 0801795 0.pdf Download (1MB) | Preview
	Text 0801795 1.pdf Restricted to Registered users only Download (357kB)
	Text 0801795 2.pdf Restricted to Registered users only Download (690kB)

Abstract

Transformasi genetik dengan perantara Agrobacterium tumefaciens merupakan salah satu metode transformasi yang umum digunakan dengan tingkat keberhasilan yang tinggi. Faktor yang dapat memengaruhi transformasi genetik dengan perantara A. tumefaciens adalah target transformasi dan lama waktu infeksi. Target transformasi yang baik adalah eksplan yang tidak bersifat rekalsitran, dapat terinfeksi oleh A. tumefaciens serta dapat tumbuh menjadi tanaman dewasa. Waktu infeksi A. tumefaciens yang terlalu singkat dapat menyebabkan gen tidak terintegrasi dengan baik pada genom tanaman, sedangkan waktu infeksi yang terlalu lama dapat menyebabkan nekrosis pada sel tanaman. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh hormon dalam menginduksi kalus yang diperlukan sebagai target transformasi serta lama waktu infeksi yang terbaik untuk meningkatkan frekuensi transformasi. Tahapan penelitian yang dilakukan meliputi pembuatan larutan stok, sterilisasi alat dan bahan, pembuatan medium, induksi kalus dari daun kaca piring dengan variasi hormon 2,4-D (1, 2, 3 ppm), kombinasi hormon TDZ 1,5 ppm IBA 1,5 ppm dan TDZ 2 ppm IBA 1,5 ppm, prekultur target transformasi, deteksi gen AtRKD4 dan hpt dengan metode PCR koloni, pembuatan starter Agrobacterium tumefaciens yang mengandung gen AtRKD4, infeksi kalus tanaman kaca piring dengan variasi lama waktu infeksi (15, 30, dan 45 menit), kokultivasi kalus, eliminasi Agrobacterium tumefaciens, dan seleksi kalus transforman tanaman kaca piring. Hasil deteksi gen dengan PCR menunjukkan bahwa koloni Agrobacterium tumefaciens EHA 105 membawa gen AtRKD4 (380 bp) dan hpt (500 bp). Hasil induksi kalus dari eksplan daun kaca piring menunjukkan bahwa kombinasi hormon TDZ-IBA tidak dapat menginduksi kalus dari eksplan daun tanaman kaca piring sedangkan hormon 2,4-D dapat menginduksi kalus bersifat meremah berwarna kekuningan dengan persentase pembentukan kalus sebesar 100%. Lama waktu infeksi yang terbaik dalam transformasi genetik kalus kaca piring yaitu 15 menit dengan frekuensi transformasi sebesar 5,08%.

Actions (login required)

View Item